發(fā)酵罐為研究小型發(fā)酵罐分批培養(yǎng)過程中大腸桿菌的菌體生長(zhǎng)狀況,本實(shí)驗(yàn)以分批培養(yǎng)法培養(yǎng)大腸桿菌,通過控制發(fā)酵過程的溫度、溶氧、攪拌速度、空氣流量、泡沫水平等參數(shù),并每小時(shí)取樣測(cè)DO值和還原糖量,制作菌體生長(zhǎng)曲線,以此判斷大腸桿菌的生長(zhǎng)發(fā)酵狀況。本實(shí)驗(yàn)選用生長(zhǎng)迅速的大腸桿菌進(jìn)行發(fā)酵罐的培養(yǎng),同時(shí)定時(shí)地取樣測(cè)定,包括對(duì)菌體進(jìn)行鏡檢、測(cè)定不同時(shí)期發(fā)酵液的細(xì)菌濁度以及殘留還原糖的變化發(fā)酵過程中,微生物的生長(zhǎng)呈一定規(guī)律,掌握微生物生長(zhǎng)曲線,可以防止菌種老化衰退、防止有害產(chǎn)物積累、提高發(fā)酵的效率,對(duì)生產(chǎn)有指導(dǎo)意義。通過測(cè)定生化指標(biāo),可大體了解菌體生長(zhǎng)曲線,并在此基礎(chǔ)上采取適當(dāng)措施促進(jìn)微生物生長(zhǎng)。生長(zhǎng)曲線中,微生物產(chǎn)生代謝產(chǎn)物或抗生素多在對(duì)數(shù)期末期或穩(wěn)定期,因此可采取方法延長(zhǎng)次期,如通過發(fā)酵罐等方法,不斷調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值,去除有害物質(zhì),增加適量的氣體和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),使微生物延遲進(jìn)入或不進(jìn)入衰退期,從而生產(chǎn)出大量的有用的代謝產(chǎn)物。發(fā)酵罐是生化、食品、醫(yī)藥、農(nóng)藥、化工等生產(chǎn)領(lǐng)域的常用設(shè)備,雖然發(fā)酵罐的類型很多,如自吸式、氣升式等。但發(fā)酵工廠用得多的還是傳統(tǒng)的通用發(fā)酵罐(機(jī)械攪拌發(fā)酵罐)[2]。發(fā)酵罐配備控制系統(tǒng),它主要是對(duì)發(fā)酵過程中的各種參數(shù)如溫度、pH、溶解氧、攪拌速度、空氣流量、補(bǔ)料、泡沫水平等進(jìn)行設(shè)定、顯示、記錄以及對(duì)這些參數(shù)進(jìn)行反饋調(diào)節(jié)控制配制培養(yǎng)基 1) 配制種子固體培養(yǎng)基100mL,分裝試管,0.1MPa滅菌20min,然后擺成斜面。 2) 配制種子培養(yǎng)液600mL,分裝50mL于一個(gè)250mL三角瓶中(作一級(jí)種子瓶),余下550mL平均分裝于三個(gè)500mL三角瓶中(作二級(jí)種子用),同上滅菌。 1.2.2接種與培養(yǎng)
1) 上罐前兩天,從冰箱中取出菌種轉(zhuǎn)接斜面,37℃培養(yǎng)24h。 2) 上罐前一天,由斜面菌種轉(zhuǎn)接一級(jí)種子瓶, 37℃振蕩培養(yǎng)12h,然后轉(zhuǎn)接二級(jí)種子瓶, 37℃振蕩培養(yǎng)10h。 1.3上罐前的準(zhǔn)備及實(shí)罐滅菌 1) 洗凈發(fā)酵罐及各聯(lián)接膠管 2) 配制發(fā)酵培養(yǎng)基5.0L,置發(fā)酵罐內(nèi),加入幾滴泡敵。 3) 校正pH電極和溶氧(DO)電極。 ) 把電極插口、取樣管、補(bǔ)料口、消泡劑料瓶等固定、密封好后,開夾套出、進(jìn)水閥V2、W1,發(fā)酵罐使夾套充滿水,用保護(hù)罩蓋住罐蓋及發(fā)酵罐,用傾倒螺釘鎖緊法蘭,開保護(hù)罩頂部排氣閥V4,啟動(dòng)蒸氣發(fā)生器,啟動(dòng)攪拌馬達(dá),調(diào)轉(zhuǎn)速300r/min,開啟冷凝水出水閥V1,開啟蒸氣閥門S1,進(jìn)行在位滅菌。 5) 當(dāng)保護(hù)罩頂部閥門V4有蒸氣排出時(shí),2min后關(guān)閉閥門,當(dāng)罐溫接近滅菌溫度時(shí),微開閥V4適當(dāng)排氣,并調(diào)整蒸氣閥S1維持罐溫。保溫結(jié)束后,關(guān)蒸氣閥S1,全開冷凝水出水閥V1,開進(jìn)水閥W3,發(fā)酵罐將溫度設(shè)定在37℃,切入自動(dòng)。 6) 當(dāng)溫度降到100℃以下,緩緩開排氣閥V4,使保護(hù)罩頂壓力表指示為零,移去保護(hù)罩。 7) 連接通氣管路,將進(jìn)氣過濾器K7口與控制臺(tái)左側(cè)空氣出口連通,開彈簧夾,接通空氣壓縮機(jī)電源,對(duì)發(fā)酵罐進(jìn)行通氣,調(diào)整空氣流量3~5L/min。 8) 當(dāng)溫度達(dá)到37℃時(shí),將預(yù)先滅菌的pH電極、DO電極(75%酒精消毒、UV消毒)接入發(fā)酵罐,連接各電極導(dǎo)線。